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Die Aminosäureseitenketten von Cdc42 unterscheiden sich also an Position 137 und 140

stärker von RhoA als an Position 139. Aus diesem Grund sollten zunächst die Aminosäuren

137 und 140 mit Hilfe der zielgerichteten Mutagenese ausgetauscht werden.

IV.3 Mutanten zur Untersuchung der Substratspezifität der Gewebstransglutaminase

Es wurden zwei RhoA-Mutanten hergestellt, die an Position 137 und 140 die Aminosäuren

besitzen, die in Cdc42 vorkommen, um deren Einfluss auf die Substratspezifität zu

untersuchen (Tab. D5).

RhoA-Mutante

RhoA E137K

RhoA K140T

Tab. D5: Mutanten von RhoA zur Untersuchung der Substratspezifität der tTG

IV.4 Untersuchung der Mutanten

Die RhoA-Mutanten E137K und K140T wurden mit dem Transglutaminierungsversuch auf

veränderte Modifizierbarkeit getestet. Sie zeigten sich in den ersten Versuchen als genauso

gute Substrate der Gewebstransglutaminase wie RhoA Wildtyp (Abb. D17).

Abb. D17: Transglutaminierung durch die Gewebstransglutaminase

Kosubstrat: Monodansylcadaverin; Fluoreszenz (oben) und SDS-Gel der Proteinbanden (unten); der Versuch

wurde für RhoA K140T zweimal mit gleichem Ergebnis durchgeführt; für RhoA E137K wurde der Versuch

einmal durchgeführt; Beachte: die etwas geringere Fluoreszenz von RhoA E137K lässt sich anhand der

Proteinmenge erklären.

RhoA Wildtyp RhoA E137K RhoA K140T Cdc42 Wildtyp

Proteinbanden

auf dem

SDS-Gel

Fluoreszenz

der Protein-

banden unter

UV-Licht

- + - + - + - +

tTG

1 2 ... 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 ... 93 94

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