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Prolin. Die Seitenkette von Threonin ist hydrophil, während die von Prolin neutral ist. Die

dritte abweichende Aminosäure von RhoG ist das Asparagin an Position 78. Dort steht in den

anderen GTPasen ein Aspartat. Aspartat besitzt eine negativ geladene Carboxylgruppe,

während in Asparagin eine positiv geladene Aminogruppe vorkommt.

In RhoD befindet sich an Position 64 ein Aspartat statt einem Glutamat, und an Position 73

steht ein Phenylalanin statt einem Serin. Phenylalanin und Serin haben sehr unterschiedliche

Seitenketten. Die von Phenylalanin ist hydrophob und hat einen aromatischen Ring. Serin

dagegen ist hydrophil, und seine Seitenkette besteht aus einem Kohlenstoffatom. Wie RhoG

besitzt RhoD an Position 78 ein Asparagin anstelle eines Aspartats. Die vierte Aminosäure,

die sich in RhoD von den anderen GTPasen unterscheidet, ist das neutrale Alanin an Position

77. Es steht anstelle des hydrophilen Threonins der anderen GTPasen.

II.4 Mutanten zur Untersuchung der Substratspezifität von DNT und CNF1

Mit Hilfe der zielgerichteten Mutagenese können gezielt einzelne Aminosäuren eines Proteins

ausgetauscht werden. Ausgetauscht wurden zunächst die Aminosäuren 64, 65, 71 und 73 in

RhoA. Die RhoA-Mutanten enthielten die entsprechenden Aminosäuren von RhoG und

RhoD. Die Aminosäuren 64 und 65 wurden ausgetauscht, da sie direkt benachbart zum

Glutamin 63 liegen. Die Aminosäuren 71 und 73 sollten wegen ihrer sehr unterschiedlichen

Seitenketten ausgetauscht werden. Zusätzlich zu den RhoA-Mutanten wurden die jeweiligen

reziproken Mutanten von RhoG und RhoD hergestellt, die die Aminosäuren enthielten, die in

RhoA vorkommen.

Da die Nummerierung der GTPasen RhoA, RhoG und RhoD unterschiedlich ist, sind in der

Tabelle D3 die äquivalenten Aminosäuren zum besseren Verständnis extra dargestellt und

hervor gehoben.

RhoA-Mutante

RhoG/D-Mutante

äquivalente Aminosäuren

RhoA D65E RhoG E63D RhoA 65 = RhoG 63

RhoA P71T RhoG T69P RhoA 71 = RhoG 69

RhoA E64D RhoD D76E RhoA 64 = RhoD 76

RhoA S73F RhoD F85S RhoA 73 = RhoD 85

Tab. D3: Mutanten von RhoA, RhoG und RhoD zur Untersuchung der Substratspezifität von DNT und CNF1

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