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Abb. D8: Transglutaminierung durch CNF1

Kosubstrat: Monodansylcadaverin; der Versuch wurde zweimal mit gleichem Ergebnis durchgeführt;

RhoD-Mutanten

Als nächstes wurden die RhoD-Mutanten untersucht, die die Aminosäuren enthielten, die in

RhoA vorkommen. Dabei zeigte sich, dass RhoD D76E Substrat von CNF1 war. RhoD

Wildtyp wurde nicht modifiziert, und auch nicht RhoD F85S (Abb. D9). Die Aminosäure 76

in RhoD (64, RhoA-Nummerierung) ist folglich entscheidend für die Transglutaminierung

durch CNF1. Anschließend wurde die reziproke RhoA-Mutante RhoA E64D getestet, um zu

überprüfen, ob Aminosäure 64 (76, RhoD-Nummerierung) auch in RhoA für die

Transglutaminierung notwendig ist. Die Transglutaminierungsreaktion mit RhoA E64D

ergab, dass diese RhoA-Mutante nicht mehr von CNF1 transglutaminiert wird (keine Abb.).

Abb. D9: Transglutaminierung durch CNF1

Kosubstrat: Monodansylcadaverin, der Versuch wurde dreimal mit gleichem Ergebnis durchgeführt;

RhoA Wildtyp RhoA D65E RhoG Wildtyp RhoG E63D

- + - + - + - + CNF1

RhoA Wildtyp RhoA D65E RhoG Wildtyp RhoG E63D

- + - + - + - + CNF1

RhoA Wildtyp RhoD Wildtyp RhoD D76E RhoD F85S

- + - + - + - + CNF1

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